顯微鏡的七種觀察方法

　　明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式，廣泛應用於(yu) 病理、檢驗，用於(yu) 觀察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能。

　　二．暗視野觀察（Darkfield）

　　暗視野實際是暗場照明發。它的特點和明視野不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體(ti) 反射或衍射的光線。因此，視場成為(wei) 黑暗的背景，而被檢物體(ti) 則呈現明亮的象。

　　暗視野的原理是根據光學上的丁道爾現象，微塵在強光直射通過的情況下，人眼不能觀察，這是因為(wei) 強光繞射造成的。若把光線斜射它，由於(yu) 光的反射，微粒似乎增大了體(ti) 積，為(wei) 人眼可見。

　　m..m暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體(ti) ，而是將光線改變途徑，使其斜射向被檢物體(ti) ，使照明光線不直接進入物鏡，利用被檢物體(ti) 表麵反射或衍射光形成的明亮圖象。暗視野觀察的分辨率遠高於(yu) 明視野觀察，zui高達0.02—0.004

　　三．相差鏡檢法（Phasecontrast）

　　在光學顯微鏡的發展過程中，相差鏡檢術的發明成功，是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們(men) 知道，人眼隻能區分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對於(yu) 無色通明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本.

　　相差顯微鏡利用被檢物體(ti) 的光程之差進行鏡檢，也就是有效地利用光的幹涉現象，將人眼不可分辨的相位差變為(wei) 可分辨的振幅差，即使是無色透明的物質也可成為(wei) 清晰可見。這大大便利了活體(ti) 細胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應用於(yu) 倒置顯微鏡。

　　相差顯微鏡的基本原理是，把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從(cong) 而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本後發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為(wei) 1/2λ，兩(liang) 束光合軸後幹涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同於(yu) 普通光學顯微鏡兩(liang) 個(ge) 特殊之處：

　　1.環形光闌（annulardiaphragm）位於(yu) 光源與(yu) 聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。

　　2.相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為(wei) 兩(liang) 種：

　　1.A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩(liang) 組光波合軸後光波相加，振幅加大，標本結構比周圍介質更加變亮，形成亮反差（或稱負反差）。

　　2.B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩(liang) 組光線合軸後光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結構比周圍介質更加變暗

　　四．微分幹涉稱鏡檢術（DifferentialinterferencecontrastDIC）

　　微分幹涉鏡檢術出現於(yu) 60年代，它不僅(jin) 能觀察無色透明的物體(ti) ，而且圖象呈現出浮雕壯的立體(ti) 感，並具有相襯鏡檢術所不能達到的某些優(you) 點，觀察效果更為(wei) 逼真。

　　原理；

　　微分幹涉稱鏡檢術是利用特製的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等，光束分別在距離很近的兩(liang) 點上通過被檢物體(ti) ，在相位上略有差別。由於(yu) 兩(liang) 光束的裂距極小，而不出現重影現象，使圖象呈現出立體(ti) 的三維感覺。

　　DIC顯微鏡的物理原理*不同於(yu) 相差顯微鏡，技術設計要複雜得多。DIC利用的是偏振光，有四個(ge) 特殊的光學組件：偏振器（polarizer）、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）。偏振器直接裝在聚光係統的前麵，使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡，即DIC棱鏡，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩(liang) 束光（x和y），二者成一小夾角。聚光器將兩(liang) 束光調整成與(yu) 顯微鏡光軸平行的方向。zui初兩(liang) 束光相位一致，在穿過標本相鄰的區域後，由於(yu) 標本的厚度和折射率不同，引起了兩(liang) 束光發生了光程差。在物鏡的後焦麵處安裝了第二個(ge) 偌瑪斯斯棱鏡，即DIC滑行器，它把兩(liang) 束光波合並成一束。

　　這時兩(liang) 束光的偏振麵（x和y）仍然存在。zui後光束穿過第二個(ge) 偏振裝置，即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前，檢偏器與(yu) 偏光器的方向成直角。檢偏器將兩(liang) 束垂直的光波組合成具有相同偏振麵的兩(liang) 束光，從(cong) 而使二者發生幹涉。x和y波的光程差決(jue) 定著透光的多少。光程差值為(wei) 0時，沒有光穿過檢偏器；光程差值等於(yu) 波長一半時，穿過的光達到zui大值。於(yu) 是在灰色的背景上，標本結構呈現出亮暗差。為(wei) 了使影像的反差達到*狀態，可通過調節DIC滑行器的縱行微調來改變光程差，光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象，通常是一側(ce) 亮，而另一側(ce) 暗，這便造成了標本的人為(wei) 三維立體(ti) 感，類似大理石上的浮雕

　　五.偏光顯微鏡（Polarizingmicroscope）

　　偏光顯微鏡的特點

　　偏光顯微鏡是鑒定物質細微結構光學性質的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當然這些物質也可用染色發來進行觀察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡。

　　偏光顯微鏡的特點，就是將普通改變為(wei) 偏光進行鏡檢的方法，以鑒別某一物質是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）。

　　雙折射性是晶體(ti) 的基本特性。因此，偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物，化學等領域。在生物學和植物學也有應用。

　　六.浮雕相襯顯微鏡（RC）

　　1975年，RobertHoffman博士發明

　　2002年，到期，各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義(yi) 命名的RC技術產(chan) 品

　　原理

　　斜射光照射到標本產(chan) 生折射、衍射，光線通過物鏡光密度梯度調節器產(chan) 生不同陰影，從(cong) 而使透明標本表麵產(chan) 生明暗差異，增加觀察對比度

　　特點

　　提高未染色標本的可見性和對比度；

　　圖象顯示陰影或近似三維結構而不會(hui) 產(chan) 生光暈；

　　可檢測雙折射物質(岩石切片、水晶、骨頭)；

　　可檢測玻璃,塑料等培養(yang) 皿中的細胞,器官和組織；

　　聚光鏡的工作距離可以設計的更長；

　　RC物鏡也可用於(yu) 明場,暗場和熒光觀察

　　七：熒光顯微鏡（FluorescenceMicroscopy）

　　熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體(ti) ，使之受激發後而產(chan) 生長波長的熒光，然後觀察。

　　優(you) 點：

　　•檢出能力高（放大作用）

　　•對細胞的刺激小（可以活體(ti) 染色）

　　•能進行多重染色

　　用途：

　　•物體(ti) 構造的觀察——熒光素

　　•熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體(ti) 熒光等https://www.shkon.com.cn

　　•發熒光量的測定對物質定性、定量分析 https://www.baikon.com